(一)高效液相色谱仪保留时间变化

1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱

2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

3.缓冲液容量不够用〉25mmol/L的缓冲液

4.柱污染每天冲洗柱

5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相

6.柱快达到寿命采用保护柱

(二)高效液相色谱仪保留时间缩短

1.流速增加检查泵,重新设定流速

2.样品超载降低样品量

3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀

5.温度增加柱恒温

(三)高效液相色谱仪保留时间延长

1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡

2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱

3.键合相流失同前(二)3

4.流动相组成变化同前(二)4

5.温度降低同前(二)5

(四)高效液相色谱仪出现肩峰或分叉

1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于峰的15%

2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂

3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

5.进样器损坏更换进样器转子

(五)高效液相色谱仪鬼峰

1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

2.样品中未知物处理样品

3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂

5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

(六)高效液相色谱仪基线噪声

1.气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压

2.污染(随机噪声)清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂

3.检测器灯连续噪声更换氘灯

4.电干扰(偶然噪声)采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)

5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压

(七)高效液相色谱仪峰拖尾

1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相

2.峰干扰清洁样品,调整流动相

3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品

4.同前(四)4同前(四)4

5.同前(四)35.同前(四)3

6.死体积或柱外体积过大连接点降至,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管

7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱

(八)高效液相色谱仪峰展宽

1.进样体积过大同(四)1

2.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散

3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点

4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣峰半宽的10%

5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相

6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器

7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小

9.样品过载进小浓度小体积样品